鴨源性成分(Duck)實時熒光PCR試劑盒

產品名稱：鴨源性成分(Duck)實時熒光PCR試劑盒

貨號:ZK-D-0383

包裝規格：50T/盒

儲存及有效期：避光-20℃以下保存，避免反復凍融，有效期為12個月。

適用儀器 ： ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列 、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、杭州博日系列等多通道實時熒光定量PCR儀

鴨源性成分(Duck)實時熒光PCR試劑盒的原理
本試劑盒采用 TaqMan 探針法實時熒光 PCR 技術，設計一對鴨源性成分(Duck)特異性引物，結合一條特異性探針，
用熒光 PCR 技術對鴨源性成分(Duck)的 DNA 或RNA進行體外擴增檢測，用于臨床上對可疑感染者的病原學診斷。

試劑盒主要組成成分

實時熒光PCR的特點

1. 靈敏度高，操作簡便。

2. 節省時間。  

3．準確性高，特異性好，假陽性低。

4．一管式熒光定量pcr檢測，避免后續污染。

5.對原始材料質t要求低。
6. 僅供科研不得用于臨床診斷使用。

檢驗方法

1. 試劑準備（試劑準備區）

（1）從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實驗所需試劑，充分融化混勻并瞬時離心以去除管壁附著液體。

（2）核算當次實驗所需要的反應數（n），并根據如下表所示反應體系計算當次實驗所需要的各種試劑量。

n =陰性對照數（1T）+陽性對照數（1T）+誤差預留量（1T）+樣本數

（3）在無菌離心管中加入上述試劑，充分混勻后瞬時離心。按照20 μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應管。

（4）蓋緊PCR反應管蓋后將PCR反應管轉移至樣本處理區。剩余試劑放回-20℃以下冰箱冷凍保存。

2.樣本準備（樣本處理區）

用QIAGEN、Roche公司提取試劑盒提取DNA，具體操作按照其試劑盒說明書操作。

3.加樣

在上述制備好的PCR反應樣本管中分別加入處理好的待測標本DNA各5μl、終體積25μl/管，蓋好PCR反應蓋混勻后瞬時低速離心，轉移到PCR儀器上。陰性對照和陽性對照管則各加5μL試劑盒自帶的陰性對照或陽性對照品，終體積為25μl/管，蓋好PCR反應蓋混勻后瞬時低速離心，轉移到PCR儀器上。

4. PCR（PCR擴增區）

（1）取樣本處理區準備好的PCR反應管，放置在實時熒光定量PCR儀樣品槽相應位置，并記錄放置順序。

（2）按下表設置儀器核酸擴增相關參數進行PCR擴增。

試劑盒的判定

1.試劑盒有效性判定：

（1）陽性對照：有典型S型擴增曲線或Ct值≤35。

（2）陰性對照：Ct值＞38或無Ct值，線形為直線或輕微斜線，無指數增長期。

2.標本結果判定：

（1）陽性：標本檢測結果Ct值≤35或有明顯指數增長期。

（2）可疑：標本檢測結果Ct值在35～38范圍內。此時應對標本進行重復檢測，如重復實驗結果Ct值仍在35～38范圍內，有明顯指數增長期，則判定為陽性，否則為陰性。

（3）陰性：標本檢測結果Ct值＞38或無Ct值。

檢驗方法的局限性

1. 當檢測樣本中被檢核酸濃度含量低于本試劑盒的zui低檢出限shi可能會發生假陰性的結果。

2. 本試劑盒僅供標本初步篩查使用，對于本試劑盒檢測陽性結果應進一步使用培養法進行確診。

實驗注意事項

1.整個檢測過程應嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區、樣本處理區和PCR擴增區進行操作，各區實驗服、儀器、耗材應獨立使用，不能混用；實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區應配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進行操作；三個區應該配有紫外線殺菌裝置。

2.每次實驗應該設置陰、陽性對照。

3.為保證試劑不受標本污染，必須將混合酶液及PCR反應液保存于試劑準備區。

4.試劑盒所有試劑在使用前應該在常溫下充分融化混勻，并應瞬時離心。

5.試劑盒內所配陰性和陽性對照在次使用前應全部轉移至標本準備區，并單獨存放。

6.為防止熒光干擾，應避免裸手直接接觸PCR反應管，并應避免在PCR反應管上進行任何標記。

7.儀器擴增相關參數應按照本說明書相關要求進行設置；不同批號試劑不能混用。

8.ABI系列熒光定量PCR儀參數設置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。

9.實驗過程中產品的廢棄物應該進行無害化處理后方可丟棄。

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